Dikarepake Gunakake
Iki digunakake kanggo ndeteksi Virus Monkeypox ing serum manungsa utawa conto exudate lesi kanthi nggunakake sistem PCR wektu nyata.
Prinsip Tes
Produk iki minangka sistem uji PCR wektu nyata Taqman® basis probe fluoresensi.Primer lan probe khusus dirancang kanggo ndeteksi gen F3L saka Monkeypox Virus.Kontrol internal sing nargetake gen sing dikonservasi manungsa ngawasi koleksi sampel, penanganan sampel lan proses PCR wektu nyata kanggo ngindhari asil negatif palsu.Kit kasebut minangka sistem lyophilized premix kanthi lengkap, sing kalebu bahan sing dibutuhake kanggo deteksi Virus Monkeypox: enzim amplifikasi asam nukleat, enzim UDG, buffer reaksi, primer lan probe spesifik.
Komponen | Paket | bahan |
Virus MonkeypoxPremix Lyophilized | 8 strip PCR tube× 6 kanthong | Primer, probe, Campuran dNTP/dUTP, Mg2+, Taq DNA polimerase, Enzim UDG |
MPV Kontrol Positif | 400 μL × 1 tabung | Urutan DNA sing ngemot gen Target |
Kontrol Negatif MPV | 400 μL × 1 tabung | Urutan DNA sing ngemot segmen gen manungsa |
Solusi Dissolving | 1 ml × 1 tabung | Penstabil |
Sertifikat Kesesuaian | 1 bêsik | / |
1. SampelKoleksi:Spesimen kudu diklumpukake ing tabung steril sing cocog
kanthi spesifikasi teknis standar.
2. Preparasi Reagen (Wilayah Persiapan Reagen)
Njupuk metu komponen saka kit, imbangan ing suhu kamar kanggo nggunakake siyaga.
3. Pengolahan Spesimen (Area Pengolahan Spesimen)
3.1 Ekstraksi asam nukleat
Disaranake kanggo njupuk conto Cairan 200μL, Kontrol Positif lan Kontrol Negatif kanggo ekstraksi asam nukleat, miturut syarat lan tata cara kit ekstraksi DNA virus sing cocog.
3.2 Lyophilized wêdakakêna dissolving lan Cithakan tambahan
Siapke premix Monkeypox Virus Lyophilized miturut jumlah sampel.Siji sampel mbutuhake siji tabung PCR sing ngemot bubuk premix Lyophilized.Kontrol negatif & kontrol positif kudu dianggep minangka rong conto.
(1) Tambah 15μL Dissolving Solution menyang saben tabung PCR ngemot Lyophilized premix, banjur nambah 5μL conto diekstrak / Kontrol Negatif / Kontrol Positif menyang saben tabung PCR mungguh.
(2) Tutup tabung PCR kanthi kenceng, gulung cepet tabung PCR kanthi tangan nganti bubuk lyophilized rampung larut lan dicampur, ngumpulake cairan menyang ngisor tabung PCR kanthi sentrifugasi kanthi cepet.
(3) Yen nggunakake instrument PCR Real-time umum kanggo deteksi, banjur langsung transfer tabung PCR menyang area amplifikasi;yen nggunakake BTK-8 kanggo deteksi, banjur kudu nindakake operasi ing ngisor iki: nransfer 10 μL Cairan saka tabung PCR menyang chip reaksi sumur BTK-8.Siji tabung PCR cocog karo siji sumur ing chip.Sajrone operasi pipetting, priksa manawa pipette vertikal 90 derajat.Tip pipette penghalang aerosol kudu diselehake ing tengah sumur kanthi gaya moderat lan mandheg nyurung pipette nalika tekan gear pisanan (kanggo ngindhari gelembung).Sawise sumur diisi, njupuk membran chip reaksi kanggo nutupi kabeh sumur lan chip kasebut banjur ditransfer menyang area deteksi amplifikasi.
4. Amplifikasi PCR (Area Deteksi)
4.1 Sijine tabung PCR / chip reaksi menyang tank reaksi lan nyetel jeneng saben reaksi uga ing urutan sing cocog.
4.2 Setelan fluoresensi deteksi: (1) Virus Monkeypox (FAM);(2) Kontrol Internal (CY5).
4.3 Jalanake protokol cycling ing ngisor iki
Protokol ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
Langkah-langkah | Suhu | Wektu | Siklus | |
1 | Pra-denaturasi | 95 ℃ | 2 min | 1 |
2 | Denaturasi | 95 ℃ | 10 s | 45 |
Annealing, extension, akuisisi fluoresensi | 60 ℃ | 30 s |
Protokol BTK-8:
Langkah-langkah | Suhu | Wektu | Siklus | |
1 | Pra-denaturasi | 95 ℃ | 2 min | 1 |
2 | Denaturasi | 95 ℃ | 5 s | 45 |
Annealing, extension, akuisisi fluoresensi | 60 ℃ | 14 s |
5. Analisis asil (waca Manual Pengguna Instrumen)
Sawise reaksi, asil bakal disimpen kanthi otomatis.Klik "Analisis" kanggo nganalisa, lan instrumen kanthi otomatis bakal napsirake nilai Ct saben sampel ing kolom asil.Asil kontrol negatif lan positif kudu cocog karo "6. Kontrol Kualitas " ing ngisor iki.
6. Kontrol kualitas
6.1 Kontrol Negatif: Ora ana Ct utawa Ct> 40 ing saluran FAM, Ct≤40 ing saluran CY5 kanthi kurva amplifikasi normal.
6.2 Kontrol Positif: Ct≤35 ing saluran FAM kanthi kurva amplifikasi normal, Ct≤40 ing saluran CY5 kanthi kurva amplifikasi normal.
6.3 Asil kasebut sah yen kabeh kritéria ing ndhuwur kapenuhi.Yen ora, asil ora sah.
Interpretasi asil
Asil ing ngisor iki bisa uga:
Nilai Ct saluran FAM | Nilai Ct saluran CY5 | Interpretasi | |
1# | Ora Ct utawa Ct>40 | ≤40 | Virus Monkeypox negatif |
2# | ≤40 | Sembarang asil | Virus monkeypox positif |
3# | 40–45 | ≤40 | Tes maneh;yen isih 40~45, laporake minangka 1# |
4# | Ora Ct utawa Ct>40 | Ora Ct utawa Ct>40 | ora sah |
CATETAN: Yen asil ora bener, sampel kudu diklumpukake lan dites maneh.
Jeneng produk | Cat.Ora | Ukuran | spesimen | Urip beting | Trans.& Sto.Temp. |
Monkeypox Virus Real Time PCR Kit | B001P-01 | 48 tes / kit | Serum/Lesion Exudate | 12 wulan | -25~-15 ℃ |